非瘟疫苗生產線建成!順利完成3000余萬份的生產儲備

時間:2021-06-30    點擊:36

6月19-20日,由中國獸醫藥品監察所、中國獸藥協會聯合舉辦的第八屆中國獸藥展覽會在河南鄭州隆重召開。本屆展覽會以貫徹總書記對農業科技創新系列講話精神為主線,以“綠色發展 合作共贏”為主題,充分展示改革開放以來我國獸藥行業取得的輝煌成績和新時代獸藥人的精神風貌,獻禮中國共產黨百年誕辰。

  展會舉辦多場次主題鮮明、形式新穎、高水平的報告會、學術講座、專題論壇。安排了獸藥科研成果信息發布、成果轉讓簽約、新版獸藥GMP相關設備產品推介會等系列活動,加快推進獸藥科技的做大做強,助力新版獸藥GMP的順利實施。在主題報告會上,哈爾濱獸醫研究所步志高所長應邀作《非洲豬瘟防控與疫苗研制進展》專題報告。

步志高所長首先強調了非洲豬瘟疫苗研發的重要性并介紹了非洲豬瘟疫苗的研制進展。

  完成候選的疫苗實驗室研究及中間試制

  2018年10至11月,分離獲得我國流行非洲豬瘟病毒株,完成了全基因組序列測定和分析,建立了感染發病模型;2018年11月至2019年5月,以我國流行毒株為基礎,經系統安全性和有效性研究,篩選出1株安全有效的弱毒疫苗HLJ/18-7GD株;2019年6月至2020年2月,初步完成了疫苗實驗室產品質量研究、大規模生產工藝研究及中間試制、生物安全評價中間試驗。

  安全評價完成環境釋放和第一階段臨床實驗

  2020年3月24日始,先后在黑龍江、河南和新疆的4個獨立豬場開展生物安全評價環境釋放試驗和第一階段臨床試驗,包括育肥豬3077頭、能繁母豬28頭和家雜野豬25頭。

  完成安全評價生產性試驗和第二階段臨床試驗

  2020年10日3日起,先后在黑龍江、河北和湖北5個試驗豬場開展安全評價生產性試驗和第二階段臨床試驗,育肥豬11410頭、母豬201頭。黑龍江肇州、湖北武昌、河北巨鹿和黑龍江雙城四個基地育肥豬試驗已順利完成,有關樣品檢測、數據分析、總結報告等有序推進中。母豬安全評價生產性試驗已完成第一胎,第二胎試驗有序進行之中。

  步志高所長表示,當前非洲豬瘟疫苗研發主要面臨以下挑戰:

  非洲豬瘟病毒結構龐大復雜,基因組超過180Kb,約編碼150余個潛在基因;

  滅活或亞單位疫苗難以誘導中和抗體,難以提供有效保護,弱毒疫苗理論上更具可行性;

  病毒只感染并致死豬和野豬,體外只能在豬原代巨噬細胞增殖,難以通過傳代致弱途徑獲得安全有效弱毒疫苗;

  通過精準刪除毒力和免疫抑制基因,獲得安全有效弱毒疫苗是目前相對可行的技術路線。

  非洲豬瘟弱毒疫苗構建策略

  步志高所長介紹了非洲豬瘟弱毒疫苗構建策略和1種7基因聯合缺失方案成功構建候選弱毒疫苗,經研究,該疫苗不致死不致病SPF豬,遺傳穩定,體內連續傳代不返強,免疫豬對強毒致死攻擊提供有效保護。

  研究調查發現,非洲豬瘟基因II型低致死自然突變株臨床癥狀表現為關節腫脹、癱瘓、皮膚腫塊、皮膚壞死。較低劑量不致死,較高劑量致死率40-60%。國內自然變異株為CD2v編碼核苷酸突變或缺失HAD表型喪失。

HLJ/18-7GD免疫有效阻斷低致死自然變異株水平傳播

弱毒疫苗實驗室研究和產品中間試劑

  第一階段田間試驗包括育肥豬、母豬及野豬安全評價環境釋放試驗和針對商品育肥豬的安全性、有效性臨床試驗。

  2020年3月23日農業農村部批準在3省區開展第一階段臨床試驗。黑龍江、河南和新疆三個封閉基地開展首期臨床試驗,先后入組2962頭育肥仔豬,分別于4月6日、5月10日和6月8日啟動免疫。大慶肇州31-37日齡育肥豬1060頭,4月6日首免;洛陽孟津39-47日齡育肥豬562頭,5月10日首免;石河子150團37-43日齡育肥豬1340頭,6月8日首免。商品育肥豬3000余頭,能繁母豬28頭及其分娩仔豬和家雜野豬25頭均嚴格生物安全隔離,不得銷售或利用,全部無害化處理。

  第二階段田間試驗是育肥豬、母豬生物安全生產性試驗和商品豬的安全性、有效性臨床試驗。

  2020年8月20日農業農村部批準進入生物安全評價生產性試驗階段。黑龍江省兩個封閉試驗基地先后入組3400頭育肥仔豬及201頭懷孕母豬,自10月3日起先后注苗,開展田間環境下的生物安全生產性試驗。黑龍江省肇州市及牡丹江市生物安全生產性試驗10月3日首免。

  2020年9月18日農業農村部批準在3省區開展第二階段臨床試驗黑龍江、河北和湖北等四個臨床試驗封閉基地開展第二階段臨床試驗,先后入組7900、2020和1970頭育肥仔豬,分別于10月4日、10月18日和10月18日啟動免疫。大慶肇州和雙城31~37日齡育肥豬7900頭,10月4日首免(哈獸研ABSL-3攻毒評價);河北巨鹿基地37~43日齡育肥豬2020頭,10月18日首免(中國ACDC ABSL-3攻毒評價);河北武漢基地39~47日齡育肥豬1970頭,10月18日首免。商品育肥豬3000頭能繁母豬200頭及其生產仔豬均嚴格生物安全隔離,不得銷售或利用,全部無害化處理。

  結果表明第一階段臨床試驗攻毒保護效力:

  單劑量(5.0lg)一次接種,2個月后攻毒存活保護50%左右;

  單劑量(5.0lg)兩次接種,2個月后攻毒存活保護80%以上;

  10倍劑量(6.0lg)一次接種,2個月后攻毒存活保護80%以上。

  核酸檢測qPCR方法調整

  步志高所長表示對非洲豬瘟病毒核酸檢測方法需要進行調整,目前所有樣品編盲,重復采集三份,GCP中心檢測、留樣各一份,中監所平行檢測一份。步志高所長指出目前需要圍繞新劑量標準補充質量研究資料尤其是對其安全性和有效性。

  目前實驗表明疫苗對商品育肥豬具有良好的安全性。

  團隊先后在五省區的8個豬場開展共14487頭商品育肥豬的田間試驗,分別觀測132天至184天。并對田間試驗100萬余豬次臨床觀察記錄、910頭豬2.5萬余次體溫記錄和2100頭豬剖檢觀察記錄的數據分析表明:疫苗接種對育肥豬生長無顯著影響,未觀察到因疫苗接種引起的明顯臨床異常及病理損傷。

  在第一階段育肥豬臨床試驗中,疫苗接種豬及其同居豬平均死淘率為2.6%,對照組豬平均為1.8%。

  第二階段育肥豬臨床試驗中,疫苗接種豬及其同居豬平均死淘率為13.4%,對照豬為14.1%。

  結果表明:疫苗接種豬和同居豬的死淘率與對照豬無顯著差異。

  試驗豬群的豬藍耳病病毒(PRRSV)、豬圓環病毒2型(PCV2)的混合感染普遍,繼發細菌性疾病情況復雜。臨床試驗豬群的總體死淘率與相同來源仔豬、相似養殖環境場豬群的平均水平相當。疫苗接種組和同居組與對照組無顯著性差異,表明疫苗接種對豬群死淘率無影響。

  隨機選取850頭育肥豬定期稱重監測疫苗接種后體重增長情況。疫苗接種后4個月,免疫豬、同居豬和對照豬平均體重分別為111.0±10.9kg、113.3±9.7kg和109.9±11.2kg,平均日增重分別為0.81±0.10kg、0.83±0.08kg和0.80±0.10kg。免疫接種豬、同居組豬及對照豬之間無顯著性差異,表明疫苗接種對育肥豬生產性能無影響。

  按照試驗方案,疫苗接種后至出欄前,定期采集試驗豬抗凝血液、口肛拭子及剖檢組織樣品60000余份,檢測疫苗毒核酸。疫苗接種后在育肥豬體內呈低水平復制,可在部分免疫豬口肛拭子中檢測到疫苗病毒核酸,主要在接種后5周內,無持續排毒。

  田間試驗中,疫苗以0.1-10倍劑量共接種11880頭商品育肥豬,接種后分別觀測132天至184天不等,未觀察或檢測到疫苗毒株毒力返強。疫苗接種后定期采集血清樣品7500余份,檢測非洲豬瘟及其他5種重要豬病原共8種特異抗體。

  疫苗接種后第1、2和3個月,非洲豬瘟疫苗特異抗體轉陽率分別為69.1%(661/957)、80.6%(684/849)和93.0%(824/886)。單劑量和10倍劑量同居豬(與疫苗接種豬同圈混養的未接種豬)同居飼養1、2和3個月抗體轉陽率分別為0%(0/204)、1.2%(2/172)和4.4%(8/180)。

  疫苗接種豬同舍飼養的未接種疫苗對照豬以上3個時間點均未檢測到抗體轉陽(0/429) 。結果表明,疫苗傳播能力低,無連續水平傳播能力。非洲豬瘟弱毒疫苗接種對豬瘟、豬藍耳病、口蹄疫、偽狂犬和圓環病毒等其它常規疫苗接種免疫效果無干擾。

  免疫育肥豬對強毒致死攻擊提供有效保護。

  田間試驗期間,免疫接種育肥豬先后8次分別轉運至哈獸研和中國動物CDC的生物安全實驗室,采用非洲豬瘟強毒致死攻擊保護試驗。結果,存活保護率82.6%至100%,平均89.3%(143/160);單劑量—次接種保護持續期2個月以上。

  步志高所長表示弱毒苗對母豬及生產仔豬健康和生產性能無影響。

  團隊先后在黑龍江北安市和牡丹江市的2個豬場開展能繁母豬農業轉基因生物安全評價環境釋放試驗和生產性試驗,分別設單劑量接種組、10倍劑最接種組及未接種對照組。疫苗接種后,環境釋放試驗28頭母豬觀察了183天,生產性試驗201頭母豬已觀察217天。疫苗接種母豬后未觀察到慢性或急性臨床不良反應,生長狀況良好,發情與受孕及胚胎發育正常。

  疫苗接種母豬流產率為1.23%,單胎平均產仔數及健仔率分別為11.587.3%;對照母豬的流產率為2.56%;單胎平均產仔數及健仔率分別為11.6及87.6%;疫苗接種組與對照組相比無顯著性差異,與提供試驗母豬場同期的另外5O4頭母豬相當。目前生產性試驗母豬免疫后第二胎試驗仍在繼續進行中。

  生產性試驗中,隨機選取測定901頭仔豬出生重,760頭仔豬斷奶重。疫苗免疫組母豬產仔豬與對照組母豬產仔豬相比均無顯著性差異。

  生產性試驗中,隨機選取單劑量接種母豬18胎和10倍劑量母豬7胎的新生仔豬,每胎隨機選取3頭剖檢,檢測血液和組織中疫苗毒核酸。結果陽性仔豬比例單劑量母豬組為11.1%(6/54),10倍劑量組母豬組為19.0%(4/21),陽性仔豬主要來自妊娠中后期接種母豬。

  進一步對新生仔豬血液、口肛拭子和臟器樣品等進行跟蹤監測,結果表明,疫苗毒在仔豬出生后2個月內均被機體有效清除。

  環境釋放試驗母豬分娩仔豬隨機選取30頭觀察至142日齡。生產性試驗母豬分娩仔豬23窩共219頭已觀察至127日齡。臨床表現,統計分析結果顯示死淘率、增重等指標均無異常。疫苗接種對繁殖母豬發情、受孕、妊娠無影響;對母豬產仔數、健仔率及仔豬出生重、斷奶重等生產指標無影響。

  初步可得出如下結論:

  1. 通過實驗室1100余頭SPF豬安全性和有效性實驗研究,以及田間14487頭商品育肥豬和229頭能繁母豬試驗,已有的數據表明,非洲豬瘟弱毒疫苗(HLJ/18-7GD株)遺傳穩定,接種后不致病、不返強,對育肥豬生長發育、增重和死淘等無不良影響;對田間商品豬存活保護率80%以上。

  2. 對接種母豬繁殖性能無明顯影響,對分娩仔豬健康狀況及生產性能無明顯異常。鑒于繁殖母豬生產利用周期長達3-5年,疫苗接種的持續影響有待進一步觀測。

  3. 大規模生產工藝可行,質量可控,成本經濟,已具備生產應用條件。

  步志高所長提到,哈獸研全資下屬哈爾濱維科生物技術公司的建成非洲豬瘟疫苗生產線,2020年9月30日通過獸藥GMP靜態驗收。按照農業農村部部署要求,依據疫苗制造及檢驗試行規程,順利完成94萬瓶,3000余萬頭份的生產儲備。

  步志高所長在會議中建議疫苗限用于全進全出商品育肥豬。暫不用于繁殖用的母豬及種公豬。

  最后步志高所長在會議中表示要實現的既定目標:

  安全性達到活苗應有標準

  能有效提供強毒攻擊保護

  大規模生產工藝高效可行

  公共產品具有成本經濟性

  步志高所長強調,要高度重視、積極推進非洲豬瘟疫苗研發工作,堅持尊重科學規律,堅持時間服從質量,嚴格按照程序開展研發工作,確保疫苗的安全性、有效性,確保經得起科學和實踐檢驗,為生豬產業健康發展作出貢獻。

  堅持科學,只爭朝夕。

  要充分認識疫苗研發對我國生豬生產的重要性,按照時間服從質量、穩妥有序推進的要求開展研發工作,力爭早日投入生產應用。



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